凝血實驗操作應注意的哪些問題?
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(1)孵育時間與溫度是在一期法凝血酶原時間測定時應嚴格控制的參數。血漿絕不能在37℃下放置超過10分鐘,凝血活酶放置時間也不能超過說明書所規定的時限。
(2)血液凝固主要是酶催化的反應,因此實驗過程中要嚴格控制理想的PH環境和溶液的離子強度。多數常規試驗都在處於血液生理PH值緩衝範圍的緩衝系統中進行。反應混合物的PH值必須處於7.2-7.4之間。
(3)試驗結果準確還取決於所用的反應物的量、加入順序和不同反應物的孵育時間。如每次APTT實驗時,活化部分凝血活酶試劑和血漿混合物的孵育時間必須一致。混勻過程決定了APTT試驗中接觸活化的量,在孵育時如果將活化部分凝血活酶與血漿混合的技術不佳,將會改變測定結果。
(4)實驗前應檢查血漿是否有溶血、黃疸、脂血和出現凝塊。紅細胞膜含有磷脂,溶血標本具有與血小板第Ⅲ因子(磷脂)相似的凝血活性,這種磷脂能縮短溶血血漿的APTT值。標本中如果出現凝塊,無論該凝塊多麼小,均會影響實驗結果。
(5)血液與抗凝劑的比例必須相當精確。抗凝劑在血標本的絕對含量可改變血漿中鈣離子濃度,進而影響實驗結果,一定要注意採血時血漿與抗凝劑的比例。
HCT對枸櫞酸鈉抗凝血漿APTT,PT的影響
HCT(%) PT(s) APTT(s)
10 10.0±0.58 23.3±3.2
20 10.4±0.17 28.2±1.4
40 11.1±0.66 33.3±4.3
60 13.5±1.46 37.2±4.0
70 14.9±0.98 38.5±3.1
80 52.5±7.74 60.5±10.3
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