詳解HIV抗體確認實驗
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根據衞生部規定,HIV-1抗體陽性報告必須由衞生部認證並取得資格的HIV抗體確認實驗室出具才有法律效應。
最常用的HIV-1抗體確認實驗方法是免疫印跡法(Wwstern Blot,WB)和條帶免疫印跡法(Strip Immunoblot Assay, SIA或Linear Immunoblot Assay, LIA),其中以WB法最常用。
1.免疫印跡法 H IV抗體確認的首選方法,他能同時檢測不同HIV-1抗原組分的抗體,因此能夠鑑別或肯定初篩檢測的結果。
2.條帶免疫印跡法 WB實驗基本相同,只是條膜上抗原來源和組成有所區別。檢測時信噪比高,本地清晰,無潛在假陽性干擾,且可通過調整條膜上HIV抗原量,克服了WB實驗中使用病毒裂解產物而可能產生的固相載體上某些重要抗原量不足的缺點。這類試劑特異性很高,但也可能由於病毒株在所合成抗原決定簇部位發生突變導致HIV抗體假陰性結果;另一個缺點是由於合成抗原不能糖基化,其立體構像與天然抗原分子有一定差異,在一定程度上可能影響了模擬真實HIV抗原檢測抗體的能力。
HIV-1抗體確認實驗結果的評價 免疫印跡實驗的結果是根據硝酸纖維素條膜特異性HIV抗原位置上出現的帶型不同來判斷HIV抗體為陽性、陰性和不確定。
陽性和陰性結果的判斷標準:美國CDC的標準為國際公認。
陽性和陰性結果的判斷標準
HIV-1抗體陽性
HIV-1抗體陰性
僅gp41 沒有條帶;零星條帶
Gp120/gp160加上gp41或P24
HIV抗體不確定(或可疑)結果的評價 在某些情況下,樣品顯示不典型的HIV反應性條帶圖譜,既不能確定為陽性也不能確定為陰性,稱為HIV抗體不確定或可疑陽性。
以下原因可能導致HIV-1抗體不確定結果的出現:①HIV-1急性感染後,抗體剛出現,僅顯示gp160或120,或P24,P31,P55帶;此時ELISA往往已顯示陽性反應;②非特異反應,如在高丙球蛋白血癥,某些病毒性疾病和寄生蟲感染,自身免疫性疾病等情況下可出現該現象;③極少數晚期艾滋病患者;④與HIV裂解物中的宿主細胞成分發生交叉反應;⑤樣本交叉污染。
對HIV抗體不確定的受檢者必須進行隨訪,通常為每3個月1次,共隨訪2次。如隨訪過程中出現特異性HIV抗體反應條帶如gp160或120,則做出HIV-1抗體陽性結論。如隨訪6個月後帶型消失或沒有變化,則做出HIV抗體陰性報告
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