精子活動率 做定量精子制動化試驗
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爲了觀察人體血液中抗精子抗體的動態變化,瞭解病情的轉歸及治療效果,實施抗體的定量測定是非常必要的,但歷來所用的抗體定性測定方法,都不能解決這一問題。雖然把原血清作對倍稀釋之後做精子凝集試驗,也可大致瞭解抗精子抗體的強弱程度,但精子凝集試驗難以把非特異性的精子凝集與抗精子抗體引起的特異性精子凝集相鑑別。而且通常用於凝集試驗的被檢血清都要先行稀釋 4~ 16 倍,判斷凝集的精子從 2 條精子的小凝集塊到上百條精子以上的大凝集塊,強弱差距很大,所以要定量測定抗精子抗體的效價很困難。
半定量精子制動化試驗是以被檢原血清進行抗精子抗體測定,當抗體效價不很強,被檢血清的精子活動率(T)在 60% ~ 20% 之間時,與對照血清的精子活動率(C)可以進行比較(C/T),若血清抗體效價很強,T 的精子活動率在 3% ~ 1% 之間,C/T 比較則失去意義。假如T 的活動率變爲 0,C/T 比較值(SIV)變成無限大(∞ ),這時就無法測出抗體量到底有多少。定量的精子制動化試驗的特點在於先把被檢血清做對倍稀釋,按半定量法求出各稀釋度的精子活動率(T),隨後測定標準陰性對照血清的精子活動率(C),然後按公式 C - T/C × 100計算出精子制動化率(Y)。
當抗體效價高時,精子活動率(T)接近於 0,而 Y 值接近 100,隨着血清對倍稀釋,T 值逐漸接近 C 值,這時 Y 將接近於 0。若把血清稀釋倍數作橫軸,把各稀釋度的 Y 作縱軸,根據 Y 的變化,就可以繪出精子制動化率遞減圖,將遞減曲線與 50% Y 的直線相交點,稱爲 50% 精子制動化指數,這個指數的血清稀釋倍數,就是我們要尋找的 50%精子制動化抗體效價(SI),SI值不但能準確地表示抗體量,而且重現性很好。
由於檢測的指標是精子活動率,所以反應時間是關鍵因素。香山浩二等人研究指出,1~ 3h之內測定的 SI值誤差性小,隨着反應時間延長,SI值的誤差性變大。因此,要作不同檢體的 SI比較,必須規定在一定時間內進行,如果每次測定有標準陽性血清的 SI作對比,這對修正被檢血清 SI的誤差性極爲重要。臨牀測定以 2~ 3h內判斷 SI值爲最好。
【準備】
(1)待檢血清:從門診患者靜脈抽血,分離血清,經 56℃ 30min滅活處理,置 - 20℃ 凍存備用。
(2)精子懸浮液製備:用手淫法,取健康男子精液,置室溫液化,以離心沉澱法(1350×g,5min),除去精漿,用約 20倍沉澱精子量的 10% 滅活未婚婦女血清生理鹽水(UW S-生理鹽水)洗滌沉澱精子 2次,然後再用少量 10% UW S-生理鹽水加入沉澱精子塊上面,輕輕搖散底部的精子沉澱塊,置室溫 5~ 10min,收集上層浮游的活動精子,用 10% UW S-生理鹽水調整精子濃度爲 40×106/mL,供實驗用。
(3)補體血清:採用市售或自制的豚鼠血清。
【方法】
(1)待檢血清用滅活的未婚女性血清或 10% 滅活家兔血清作對倍稀釋。按精子不動化試驗方法,測定各稀釋度的精子運動率(T% )。
(2)以標準未婚女性血清爲對照,測定其精子運動率(C% )。
(3)根據 C - T×100公式算出各血清稀釋度精子制動化率(Y)。
【判斷】
以 Y 作縱軸,血清稀釋倍數作橫軸,繪出 S狀彎曲的衰減曲線,這條曲線與 50% 精子運動率直線相交叉點的血清稀釋倍數即爲 50% 精子制動抗體效價(ST)。也就是該被檢血清所含的抗體量。
根據同一個體不同時期的檢測結果可以觀察其抗體量的動態變化。或者多個樣品同一時間檢測結果亦可以比較個體間所含抗體量的不同,這對病態和臨牀治療效果的判斷是一種非常重要的檢查手段。定量精子制動化試驗的特點是定量準確、重複性好,即使是輕微變化,亦能作出判斷。缺點是操作程序繁多,一次不能作多個樣品處理,一般需要先作定性測定,對陽性樣品再進行定量檢查。爲了使檢測結果無誤,每次檢測時,最好用標準陽性血清作對照,以便校正樣品所得的結果。
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